Для исследования гемостаза при получении крови необходимо сохранить все факторы свертывания в неактивном состоянии. С этой целью используют стабилизаторы крови:
- гепарин (за счет образования комплекса с АТ-III ингибирует основные протеазы свертывания)
- ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) – образует хелатный комплекс с ионами Са2+, который необходим для формирования теназного и протромбиназного комплексов.
- цитрат натрия, связывает ионы Са2+.
Оценка тромбоцитарного звена
1. Исследование количества тромбоцитов.
2. Исследование агрегационной способности тромбоцитов. Производится с использованием различных индукторов агрегации (АДФ, коллаген, тромбин, арахидоновая кислота). Пробы помещаются в кювету агрегометра, который представляет собой оптический прибор с регистрацией проходящего света, и добавляется индуктор. При формировании агрегатов повышается прозрачность плазмы и, следовательно, увеличивается величина проходящего через кювету потока света.
Оценка плазменного звена
1. Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ). АЧТВ используется как тест для оценки внутреннего каскада свертывания плазмы и слежения за антикоагулянтным действием гепаринов. Для нормального АЧТВ требуется наличие следующих факторов свертывания крови: I, II, V, VIII, IX, X , XI и XII. Методика заключается в смешивании исследуемой плазмы с каолином (активатором свертывания) и фосфатидилэтаноламином и измерении времени до образования сгустка. Снижение времени АЧТВ свидетельствует о гиперкоагуляции, а повышение – о гипокоагуляции.
2. Определение протромбинового времени (ПТВ) используется для определения ак-тивности фактора VII, контроля за лечением антивитамин К-препаратами, общем скрининге системы гемостаза. Измеряется время образования сгустка после добавления к плазме тромбопластина, фосфолипидов и хлорида Ca2+.
Для нивелировки отличий тромбопластина разных производителей и унифицирования результатов в настоящее время используется МНО (Международное Нормализованное Отношение, INR, International Normalised Ratio) – показатель, характеризующий состояние протромбинового комплекса:
МНО = (ПТВ пациента / ПТВ контроль)МИЧ,
где МИЧ – международный индекс чувствительности (определяется производителем тромбопластина).
3. Тромбиновое время (ТВ) – заключается в определении времени свертывания цитратной плазмы при добавлении раствора тромбина со стандартной активностью. Показатель характеризует конечный этап свертывания крови – скорость превращения фибриногена в фибрин под влиянием тромбина, и зависит от концентрации фибриногена и продуктов его деградации в крови.
4. Концентрация фибриногена – активируют свертывание точного объема плазмы добавлением избытка хлорида кальция, после чего образованный сгусток отжимают и взвешивают.
5. Концентрация фибриногена по Клауссу – измеряется время свертывания плазмы после добавления избытка тромбина. В этом случае время свертывания зависит только от концентрации фибриногена в плазме.
6. Концентрация D-димеров в сыворотке пропорциональна активности тромбообра-зования, скорости фибринолиза и количеству лизируемого фибрина. Определение D-димеров проводится различными методами (иммуноферменгным методом с использованием моноклональных антител, иммунодиффузии, методом турбидиметрии, латекс-агглютинации).
Глобальные тесты оценки гемостаза
Тромбоэластография (ТЭГ) – вязкоэластичный тест, который качественно и полуколичественно позволяет охарактеризовать процесс образования сгустка, его механические характеристики, плотность, стабильность и процесс фибринолиза.
Схема регистрации процесса тромбообразования и фибринолиза
на тромбоэластографе
Принцип тромбоэластографии заключается в расположении образца между двумя поверхностями, на одну из которых подаются вращательно-колебательные движения, а другая соединена с устройством, принимающим и фиксирующим колебания. После добавления в образец активатора свертывания начинается образование сгустка. По мере тромбообразования и последующего фибринолиза изменяется характер кривой.